一氧化氮合成酶的基因克隆与功能鉴定

作者：罗希帆; 周灵美; 谢晓东; 陈帅君; 杨红澎; 吴疆^*

来源：天津农学院学报, 2022, 29(02): 13-17.

DOI：10.19640/j.cnki.jtau.2022.02.003

• 基因克隆
• 蛋白纯化
• 一氧化氮合成酶
• 活性测定

一氧化氮（NO）作为一种极其重要的生物信息分子，其合成依赖于一氧化氮合成酶（NOS），因此NOS在动植物体内发挥着不可替代的作用。本研究通过克隆海洋细菌Exiguobacterium aurantiacum JM-2的一氧化氮合成酶基因，利用Bam H Ⅰ和Hind Ⅲ对目的基因和载体进行双酶切和连接，然后用热激转化法将目的基因转到大肠杆菌Top10和BL-21中，使其成功表达，得到转化菌株，再利用IPTG诱导蛋白表达并进行蛋白纯化，最后对该蛋白的活性进行测定和分析。结果表明，当培养基中IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L、诱导时间为5 min时，NOS活性最大。

• 单位
  天津农学院