miR-185对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

作者：李曼妮; 刘建平; 陶永胜; 陈静波; 陈馨馨; 谭志琴

来源：山东医药, 2016, 56(41): 10-13.

DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.41.003

• 肝癌
• 微小RNA-185
• M2型丙酮酸激酶
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的探讨miR-185对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法用Target scan human在线软件预测miR-185调控的靶基因;采用荧光素酶报告载体系统检测miR-185对M2型丙酮酸激酶(PKM2)3’UTR荧光酶活性的影响;蛋白质印迹法检测miR-185对PKM2蛋白表达的影响。将肝癌HepG2细胞分为观察1组、对照1组、观察2组、对照2组、观察3组。观察1组转染miR-185 mimics,对照1组转染Scramble;观察2组转染PKM2-siRNA,对照2组转染Control-siRNA;观察3组转染miR-185 inhibitors与PKM2-siRNA。采用MTT法检测上述5组细胞增殖能力,采用Annexin V-FITC和PI染色法检测上述5组细胞凋亡率。结果在线预测软件发现miR-185与PKM2的3’UTR有共同的结合位点,荧光素酶报告载体系统显示在Hep G2细胞中miR-185能抑制Wild-PKM2报告质粒组荧光素酶的活性,Western blotting结果显示miR-185能下调Hep G2细胞中PKM2蛋白表达,证实PKM2是miR-185直接调控的靶基因;MTT结果显示,观察1组与观察2组Hep G2细胞OD值分别为0.446±0.034、0.472±0.028,与对照1组(0.649±0.041)和对照2组(0.610±0.023)相比,差异均有统计学意义(P均<0.05)。观察3组的OD值为0.606±0.016,与对照1组或对照2组相比,差异均无统计学意义;凋亡实验结果显示,观察1组与观察2组Hep G2细胞凋亡率分别为(29.13±2.04)%、(27.46±1.95)%,对照1组、对照2组分别为(8.76±0.53)%、(8.51±0.47)%,观察1组、观察2组与对照1组、对照2组比较,P均<0.05。观察3组的凋亡率为(9.47±0.61)%,与对照1组或对照2组相比,差异均无统计学意义。结论 miR-185可抑制人肝癌细胞增殖并诱导细胞凋亡;机制可能是通过下调PKM2表达实现。

• 单位
  湖南师范大学; 公安边防部队总医院