八宝丹抑制TNF-α诱导C2C12成肌细胞Atrogin-1表达的研究

作者：赵棋琴; 陈进晓; 沃达; 何嘉; 彭军; 朱伟东; 任丹妮^*

来源：福建中医药, 2022, 53(07): 21-25.

DOI：10.13260/j.cnki.jfjtcm.012512

• 八宝丹
• C2C12成肌细胞
• TNF-α
• p-P65
• Atrogin-1

目的 研究八宝丹（BBD）对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的C2C12成肌细胞中核因子κB(NF-κB)通路及下游通路UPS系统中萎缩相关基因1(Atrogin-1)的作用。方法(1)筛选BBD干预浓度实验：取对数生长期C2C12成肌细胞分别予0、0.125、0.25、0.5、0.75、1 mg/mL不同浓度BBD干预48 h，采用MTT法检测细胞活力；(2)筛选TNF-α刺激细胞的浓度和时间实验：取对数生长期C2C12成肌细胞，分别予0、1、10、50 ng/mL TNF-α蛋白液刺激C2C12成肌细胞，Western blot法检测p-P65、Atrogin-1蛋白表达以筛选出TNF-α刺激细胞的最佳浓度；再根据TNF-α刺激细胞的最佳浓度干预C2C12成肌细胞0 min、8 min、15 min、30 min、1 h、4 h,Western blot法检测p-P65、Atrogin-1蛋白筛选出TNF-α刺激细胞的最佳时间；(3)BBD干预实验：将C2C12成肌细胞随机分为空白对照组、药物对照组、模型组、八宝丹组，药物对照组和八宝丹组分别加入BBD预处理2 h，再根据筛选的TNF-α刺激细胞最佳浓度和时间，于模型组和八宝丹组中加入TNF-α刺激细胞，Western blot法检测p-P65、Atrogin-1的蛋白表达水平。结果(1)筛选BBD干预浓度实验结果表明，不同浓度BBD对C2C12成肌细胞活力无影响（P>0.05），根据本课题组前期研究结果，最终选取0.75 mg/mL作为BBD干预细胞浓度；(2)筛选TNF-α刺激细胞的浓度和时间实验结果表明，10 ng/mL TNF-α刺激C2C12成肌细胞8 min后p-P65蛋白表达明显升高（P<0.05）,10 ng/mL TNF-α刺激C2C12成肌细胞4 h后Atrogin-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）；(3)BBD干预实验结果表明，与空白对照组比较，模型组p-P65、Atrogin-1蛋白表达显著上调（P<0.05,P<0.01）；与模型组比较，八宝丹组p-P65、Atrogin-1蛋白表达显著下调（P<0.05,P<0.01）。结论 BBD可抑制TNF-α诱导的NF-κB信号通路中NF-κB的磷酸化水平及下游通路Atrogin-1蛋白表达。

• 单位
  福建中医药大学