放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测

作者：倪宏波; 刘思国; 杜艳芬; 林靖凯; 刘慧芳; 王春来; 司薇; 常月红; 彭玮; 王聃; 赫明雷

来源：中国兽医科学, 2010, (06): 561-564.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2010.06.003

• 胸膜肺炎放线杆菌
• 外膜蛋白
• 诱饵质粒
• 自激活作用
• 毒性作用 Actinobacillus pleuropneumoniae
• omp
• bait plasmid
• self activation
• toxic action

为了筛选胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白在肺泡上皮细胞上的作用受体,应用酵母双杂交技术构建诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白),从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA,用PCR方法获得omp,克隆于pGBKT7载体上,进行酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用。结果表明,成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。表明pGBKT7-omp可应用在酵母双杂交系统中,用于寻找猪肺泡上皮细胞cDNA文库中与omp相互作用的蛋白质。

• 单位
  动物科技学院; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 黑龙江八一农垦大学; 兽医生物技术国家重点实验室