Lipocalin2真核表达载体的构建及在HK-2细胞中的表达

作者：金立新; 陈明

来源：中国现代医药杂志, 2018, 20(06): 10-14.

• Lipocalin2
• 基因表达
• 载体构建

目的构建Lipocalin2基因真核表达质粒并转染人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)。方法根据基因文库报道的Lipocalin2基因(登录号BC033089)的c DNA序列设计引物,扩增Lipocalin2基因全编码区,在其两端分别加上Bam H I和XhoⅠ限制性内切酶酶切位点,将人工合成的全基因定向克隆入真核表达载体pEGFP-C3,构建Lipocalin2基因真核表达质粒,利用脂质体介导,转染HK-2细胞进行表达。结果酶切和测序结果证实Lipocalin2真核表达质粒构建成功,经脂质体转染(HK-2)细胞后,RT-PCR和Western blot检测证明Lipocalin2 mRNA及蛋白在HK-2中成功高表达。结论成功构建真核表达质粒pEGFP-C3-Lipocalin2及稳定表达Lipocalin2的细胞株,为进一步研究Lipocalin2在人肾近曲小管上皮细胞转分化中的作用及机制奠定了基础。

• 单位
  北京航天总医院; 成都中医药大学附属医院