干扰烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1表达对帕金森病小鼠模型的作用及其机制研究

作者：梁栋; 侯文龙; 栗永生; 牛梦月; 徐瑞; 谢安木

来源：中华神经科杂志, 2018, 51(03): 175-180.

• 烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1
• 基因表达
• 帕金森病
• 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶

目的探讨干扰烟酰胺单核苷酸转移酶1(NMNAT1)基因表达在帕金森病小鼠模型中的作用及其机制。方法将C57BL/6种系小鼠30只按随机数字表法随机分为1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)组、干扰NMNAT1表达(siNMNAT1+MPTP)组和对照组,每组10只。siNMNAT1+MPTP组小鼠黑质注射由连接绿色荧光蛋白(GFP)的小干扰RNA(siRNA-GFP)构成的腺病毒,MPTP组及对照组注射等量GFP构成的腺病毒,然后siNMNAT1+MPTP组与MPTP组小鼠腹腔注射MPTP来构建慢性帕金森病小鼠模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。评估小鼠的运动协调能力,采用免疫荧光染色法测定黑质多巴胺能神经元数目,采用RT-PCR评估纹状体酪氨酸羟化酶(TH)表达水平,采用Western印迹法检测黑质中TH、超氧化物歧化酶1(SOD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)蛋白和Bcl2相关X(Bax)蛋白的表达。结果与对照组相比,siNMNAT1+MPTP组、MPTP组的运动协调能力[滚轴实验滑落时间:siNMNAT1+MPTP组(62.8±15.7)s,MPTP组(77.9±13.5)s,对照组(122.0±25.2)s]、多巴胺能神经元计数(siNMNAT1+MPTP组45.0±6.7,MPTP组68.0±11.3,对照组93.0±12.8)及纹状体TH表达水平均降低且差异具有统计学意义(滚轴实验滑落时间:t=-6.291,P=0.000;t=-4.865,P=0.000。多巴胺能神经元计数:t=-10.482,P=0.000;t=-4.624,P=0.000。TH表达水平:t=-9.117,P=0.000;t=-5.716,P=0.000)。与MPTP组相比,siNMNAT1+MPTP组小鼠的协调运动能力降低,但差异无统计学意义,而多巴胺能神经元计数及纹状体TH表达均明显减少(t=-5.487,P=0.000;t=-5.146,P=0.003),黑质中SOD1表达水平(t=-4.143,P=0.001)、Bcl2/Bax比值均明显降低(t=-6.303,P=0.000),Bax蛋白表达水平明显升高(t=3.550,P=0.002)。结论干扰帕金森病小鼠模型NMANT1表达可通过影响细胞凋亡、氧化应激促进多巴胺能神经元的丢失,降低小鼠的运动协调能力。

• 单位
  青岛大学附属医院; 神经内科