梅花鹿CGI99基因RNAi慢病毒载体的构建及其对鹿茸干细胞增殖的影响

作者：路晓; 孙红梅; 褚文辉; 张伟; 李春义

来源：生物技术通报, 2016, 32(08): 117-121.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.018

• 鹿茸
• RNAi
• CGI99基因
• 鹿茸干细胞

利用慢病毒介导的基因沉默体系,对梅花鹿生茸区骨膜干细胞(AP)中CGI99基因进行RNA干扰,并初步研究该基因对细胞增殖的影响。设计出1条针对梅花鹿CGI99基因的shRNA序列与载体质粒pLVTHM连接,之后与pSPAX2、pMD2.G质粒共转染HEK 293t细胞,获得重组慢病毒,感染AP细胞;通过荧光定量PCR检测CGI99基因的下调水平;通过MTT实验检测CGI99基因沉默对AP细胞增殖影响。基因的表达水平大幅度下调,干扰效率达到70.8%;MTT实验的数据曲线趋于一致。结果表明,成功构建了针对梅花鹿CGI99基因的RNAi载体并干扰了CGI99基因在AP细胞中的表达,且初步确定CGI99基因对AP细胞的增殖并无显著影响。

• 单位
  分子生物学国家重点实验室; 中国农业科学院特产研究所