重组黧豆蛋白酶的制备及其活性研究

作者：王真; 吴方晖; 阴忆烽; 张毅; 刘艳丽^*; 宋云扬^*

来源：中南药学, 2022, 20(05): 1083-1088.

• 309)" name="keyword">黧豆蛋白酶(93309)
• 瘙痒
• 重组表达
• 活性分析

目的 通过基因克隆表达和纯化，获得高纯度的重组黧豆蛋白酶(mucunain，93～309，M)，并对其生物活性进行研究，为非组胺依赖性痒觉信号通路研究提供模型物质。方法 将全基因合成的编码mucunain活性域(93～309)的基因片段克隆至pET-28a(+)-Sumo载体中，转入大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行表达。融合蛋白His6-Sumo-M用SUMO蛋白酶酶切后使用Ni-NTA亲和层析柱纯化，经透析复性得到重组黧豆蛋白酶。分别采用15% SDS-PAGE和Edman降解法对重组黧豆蛋白酶的分子量和N-端氨基酸序列进行鉴定。使用FLIPR检测技术分析重组黧豆蛋白酶的生物活性。结果 获得了纯度≥90%的重组黧豆蛋白酶，产量达到50 mg·L-1；FLIPR检测结果显示，相比于对照组，重组黧豆蛋白酶作用于Hela细胞后可以引发明显持续的钙流变化，而半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64可以抑制胞质Ca2+的变化。结论 通过基因克隆表达技术可以得到具有生物活性的重组黧豆蛋白酶。