短发夹RNA沉默Tim-3分子表达对哮喘小鼠外周血Th1和Th17细胞的影响

作者：陆小霞; 徐佳莉; 董宗祈; 陈鹏; 王莹

来源：中国当代儿科杂志, 2013, (04): 302-307.

• 哮喘
• Tim-3
• RNA沉默
• T细胞
• 小鼠

目的建立小鼠支气管哮喘模型,采用T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)特异短发夹RNA(shRNA)沉默外周血单个核细胞(PBMCs)中Tim-3的表达,探讨Tim-3对辅助性T细胞1(Th1)和Th17细胞分化的影响。方法用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘小鼠模型,分离哮喘小鼠PBMCs,用Tim-3特异的shRNA片段沉默哮喘小鼠PBMCs中高表达的Tim-3基因。Real-time PCR和Western blot检测Tim-3的表达,流式细胞分析技术(FACS)检测Th1和Th17的比例;ELISA检测细胞培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ),白介素-4(IL-4),和白介素-17(IL-17)的水平。结果哮喘组小鼠PBMCs中Tim-3 mRNA表达明显升高;使用特异Tim-3 shRNA沉默哮喘小鼠PBMCs后,沉默组PBMCs中Th1细胞比例显著升高,Th17细胞比例显著下降,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);沉默组PBMCs培养上清液中IFN-γ明显升高,IL-17明显降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),IL-4水平无明显变化。结论特异Tim-3 shRNA有效地沉默了Tim-3的表达,Tim-3表达的改变影响了T细胞的分化。

• 单位
  武汉市儿童医院