肺炎克雷伯菌乙酰基转移酶类毒素蛋白的表达与纯化

作者：朱娥; 欧竑宇; 谢英洲^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z3: 3067-3072.

DOI：10.13417/j.gab.040.003067

• 肺炎克雷伯菌
• 乙酰基转移酶毒素-抗毒素系统
• KacT
• 蛋白复合物
• 盐酸胍变性

KacT是肺炎克雷伯菌乙酰基转移酶类毒素-抗毒素系统中的毒素蛋白。KacT对大肠杆菌有生长抑制作用，因而难以在大肠杆菌中对其进行过量表达。KacA是与KacT对应的抗毒素蛋白，可中和KacT的毒性。为获得高纯度的KacT蛋白，本研究首先在大肠杆菌中表达KacAT蛋白复合物，并在KacA蛋白的N端引入六聚组氨酸标签以进行镍亲和层析；在30℃、IPTG浓度为0.2 mmol/L时KacAT蛋白复合物的表达最优。然后使用含有5 mol/L盐酸胍的变性缓冲液来解离KacA与KacT蛋白之间的相互作用。最后，经分管收集和温和梯度复性获得纯度较高的KacT蛋白。结果显示，在大肠杆菌中通过表达纯化复合物蛋白再变性解离的方法，成功分离得到KacT毒素蛋白，建立了KacT分离纯化的完整流程。

• 单位
  上海交通大学; 生命科学技术学院