非天然氨基酸pBpa在IL1β抗原表位的嵌入及其表征

作者：李闰婷; 马韩轲; 张丽萌; 聂晓宁; 代冰雪; 王林青^*; 陈龙欣^*

来源：天津师范大学学报（自然科学版）, 2022, 42(06): 23-28.

DOI：10.19638/j.issn1671-1114.20220604

• 非天然氨基酸
• 基因密码子扩展技术
• 抗体
• 蛋白质相互作用
• 光交联

为了探究表位中嵌入光敏型非天然氨基酸的蛋白质与其特异性抗体的光交联反应及其产物，基于基因密码子扩展技术，原核表达嵌入携带功能基团的非天然氨基酸蛋白质IL1β-L67pBpa，通过Western blot方法验证该突变体蛋白及其抗体的光交联功能.结果表明，本研究成功构建了pET28a-IL1β-L67TAG突变体质粒用于原核表达，在蛋白质的指定位点嵌入非天然氨基酸pBpa，并得到了高效表达的IL1β-L67pBpa. 365 nm紫外光照射后，该突变体中的非天然氨基酸pBpa光敏基团与抗体中的氨基酸在空间距离靠近时，pBpa嵌合体能与其表位抗体（康纳单克隆抗体）通过共价键的光交联形成新的复合物.本研究证实了将非天然氨基酸（活性基团）插入到蛋白质特定位点的可行性.

• 单位
  郑州师范学院; 生命科学学院