六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路抗氧化应激防治阿尔茨海默病的机制研究

作者：蔡菊; 袁永; 宋军营; 贾亚泉; 谢治深; 曾华辉; 张振强^*

来源：世界科学技术-中医药现代化, 2023, 25(03): 1002-1010.

• 六味地黄丸
• 阿尔兹海默症
• HT22细胞
• 氧化应激
• Nrf2/HO-1通路

目的 观察六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导海马神经元细胞(HT22)氧化损伤的保护作用，探讨其防治阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的作用机制。方法 (1)以过氧化氢(Hydrogen peroxide,H2O2)诱导HT22细胞，通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性，DCFH-DA荧光染色法检测细胞内ROS含量，构建基于氧化应激损伤的早期AD细胞模型；(2)制备六味地黄丸含药血清(Medicated Serum of Liuwei Dihuang Pill,MSLDP)，分别设置空白组、模型组、MSLDP组，检测细胞内SOD活力、MDA及ROS含量的变化；实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞内Nrf2、HO-1及NQO1等因子的mRNA的转录水平及蛋白表达量的变化；(3)采用Nrf2的抑制剂(ML385)抑制细胞内Nrf2的激活，RT-qPCR及Western blot法检测各组细胞内Nrf2、HO-1、NQO1等因子mRNA的转录水平及蛋白表达量的变化。结果 (1)经H2O2诱导后；随着H2O2诱导浓度的增高和时间的增长，细胞活性逐渐降低，细胞内的ROS含量则逐渐升高，细胞内氧化应激与H2O2诱导浓度和时间呈正相关。(2)模型组细胞内ROS和MDA含量较空白组升高，SOD活力下降，Nrf2与Keap1解离并入核，其下游HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达量升高；MSLDP组细胞内的ROS和MDA含量降低，SOD活力升高，Nrf2进一步入核，细胞内Keap1、HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达水平也进一步升高；(3)使用ML385抑制Nrf2后，MSLDP不再上调Nrf2及下游HO-1、NQO1蛋白的转录及表达。结论 六味地黄丸对AD模型细胞中的氧化应激具有明显的保护作用，其机制可能是通过调节Nrf2/HO-1通路中抗氧化因子的表达量来实现的。

• 单位
  河南中医药大学