布鲁氏菌omp25重组BCG的构建及其疫苗作用检测

作者:张亚丽; 诸婷婷; 王慧; 张科; 陈创夫; 王梦远; 王远志
来源:中国病原生物学杂志, 2013, (12): 1057-1060+1123.
DOI:10.13350/j.cjpb.2013.12.001

摘要

目的构建分泌性表达布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因重组卡介苗(rBCG-omp25),并免疫BALB/c小鼠,观察其免疫作用。方法利用分子生物学技术构建重组穿梭分泌载体pMV261-Ag85B-omp25,电穿孔技术导入卡介苗(BCG)。通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增、测序,以及Western blot对重组卡介苗进行鉴定。分别用rBCG-omp25、BCG腹腔接种BALB/c小鼠,于免疫后第10、20、30、40和50d称重,尾部采血,用表达纯化的融合蛋白OMP25-32a检测免疫小鼠抗体的生成情况,用流式细胞仪(FCM)检测CD4+、CD8+T淋巴细胞百分率,并计算CD4+/CD...

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