鼠肺炎沙眼衣原体毒力因子Pgp3蛋白的分段克隆表达

作者：徐宏俊; 孙毅娜; 刘全忠; 刘原君^*

来源：临床和实验医学杂志, 2021, 20(08): 785-788.

• 鼠肺炎沙眼衣原体
• Pgp3
• 基因表达
• 结构域

目的获得鼠肺炎沙眼衣原体(CM)质粒编码蛋白Pgp3氨基端(n)、羧基端(c)和中间段(m)分别删除的蛋白Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,为近一步研究其功能及沙眼衣原体(C. t)致病机制提供基础。方法用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,分别将其定向插入原核表达载体PET-30a(+)中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α、涂板、挑取单克隆提取质粒进行酶切、测序鉴定。鉴定正确的重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21,15℃诱导表达16 h和37℃诱导表达4 h,考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹法鉴定目的蛋白。结果 PCR扩增的目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc的长度分别为597、525、324 bp,Nde I和HindⅢ双酶切重组质粒后电泳显示酶切片段大小符合预期,测序结果显示插入片段序列均与基因库中一致;考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹显示目的蛋白分子量分别约为22 000、18 700和12 000,3个蛋白片段均在15℃诱导表达16 h的条件下表达量更多。结论成功表达Pgp3Δn-His、Pgp3Δm-His和Pgp3Δc-His融合蛋白,为进一步研究Pgp3的功能位点和作用机制奠定基础。

• 单位
  天津医科大学; 首都医科大学附属北京友谊医院; 天津医科大学总医院