大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法的改进

作者：蒋玲; 胡远东; 徐菲菲; 王廷华

来源：四川大学学报（医学版）, 2016, 47(05): 777-780.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2016.05.030

• 肺微血管内皮细胞
• 原代培养
• 鉴定

目的改进SD大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)原代培养方法,以获得纯化的大鼠PMVECs。方法对组织块法培养PMVECs过程中的组织取材、植块贴壁、培养基配制、传代培养进行改进包括:在麻醉前提前注射肝素钠;利用腹腔放血,待大鼠停止呼吸后剪开胸腔;改进操作以及试剂中加入双抗以降低污染率;原代培养48h即取出组织块;进行再次消化去除成纤维细胞;异硫氰酸标记的植物凝集素(FITC-BSI)鉴定培养的PMVECs。培养后在倒置显微镜下观察细胞形态。结果原代培养的细胞呈现为多角形或短梭形,呈单层铺路石样排列的典型结构。随着细胞传代或培养条件的改变,细胞形态发生变化,可呈长梭形,漩涡状排列。FITC-BSI结合实验呈绿色荧光,阳性率达到90%以上。结论通过改进分离及培养方法可获得生长状态良好、纯度高且能够稳定传代培养的PMVECs。

• 单位
  四川大学华西医院