黑曲霉pyrG遗传转化系统的构建及应用

作者：胡江峰; 刘舒雯; 杨焱; 李林霖; 李迎凯; **^*

来源：食品与发酵工业, 2022, 48(02): 15-19.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027893

• 黑曲霉
• pyrG
• 根癌农杆菌介导的转化法
• 筛选标记
• 红色荧光蛋白

用于黑曲霉遗传操作的筛选标记基因非常有限,而基因改造往往涉及诸多基因的敲除或表达,有限的筛选标记基因难以满足需要。该文构建了以pyrG为筛选标记的黑曲霉遗传转化系统,并利用该系统使红色荧光蛋白rfp在黑曲霉中成功表达。首先,运用同源重组原理完全敲除pyrG基因,在含有5-氟乳清酸和尿苷/尿嘧啶的培养基平板进行筛选,获得1株稳定遗传的尿苷/尿嘧啶营养缺陷型菌株黑曲霉ng-1。然后构建了以pyrG作为回补标记,以三磷酸甘油醛脱氢酶启动子gpdA来调节rfp基因表达的质粒,将质粒转入农杆菌AGL1并侵染黑曲霉菌株ng-1,成功获得了黑曲霉rfp表达菌株,表明pyrG筛选标记可成功用于黑曲霉的遗传转化。

• 单位
  天津科技大学; 工业发酵微生物教育部重点实验室; 生物工程学院