抗人N端脑钠肽前体抗原表位分析及单克隆抗体的研制

作者：侯亚璐; 井金苗; 魏治静; 柳峰松; 吴萌^*

来源：生物技术通讯, 2019, 30(06): 762-767.

• 人N端脑钠肽前体
• B细胞抗原表位
• 单克隆抗体
• 间接ELISA法
• 抗体特性

目的:制备并鉴定特异性抗人N端脑钠肽前体(NT-proBNP)抗原表位的单克隆抗体。方法:通过Bepipred在线表位预测方法和Epitope Prediction System软件预测人NT-proBNP B细胞抗原表位,综合2种预测结果对比优化选取合适的2个表位肽段P1和P2,偶联KLH为免疫原,免疫BALB/c小鼠,选择血清效价较高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合;经HAT筛选,间接ELISA法检测和有限稀释法进行亚克隆,得到阳性杂交瘤细胞株;采用体内诱生法制备腹水并用Protein G柱纯化抗体;经鉴定,对特异性最好的2株进行纯度、效价、亚型及亲和力的分析。结果:通过P2-KLH免疫获得的阳性杂交瘤细胞株1F9和P1-KLH免疫获得的阳性杂交瘤细胞株4H2能稳定分泌抗NT-proBNP单克隆抗体,纯度较高,能与NT-proBNP重组蛋白特异性结合,效价分别达到4×104、4×105,抗体亚型均为IgG1,相对亲和力常数分别为1.14×107和1.6×107L/mol。结论:获得2株特性良好的单克隆抗体,可为下一步研制NT-proBNP检测试剂盒提供原材料。

• 单位
  河北省科学院; 河北大学; 生命科学学院