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摘要
目的：构建AAV衣壳蛋白VP的原核表达质粒并进行蛋白表达纯化，制备针对VP蛋白的兔多克隆抗体并进行抗体验证。方法：使用PCR技术从AAV9病毒包装质粒中扩增AAV9衣壳蛋白VP，同源重组法构建衣壳蛋白表达质粒pET30a-AAV9-VP。质粒转化表达菌E.coli BL21（DE3）后，IPTG诱导目的蛋白VP表达、亲和层析法纯化VP蛋白，将纯化的蛋白免疫日本大耳朵白兔。三次免疫后获得针对VP蛋白的兔多克隆抗体，以Western blotting和细胞免疫荧光法检测抗体的应用，ELISA检测所得抗体的效价。结果：成功构建pET30a-AAV9-VP表达质粒，AAV9衣壳蛋白VP可被IPTG诱导表达，亲和层析法纯化获得高纯度的VP蛋白。该蛋白在日本大耳朵兔体内能够诱导产生多克隆抗体，ELISA 检测抗血清效价达到1：512000。结论：成功原核表达和纯化AAV9衣壳蛋白VP并制备了兔多克隆抗体。制备的抗AAV9 VP抗体能够特异性识别和结合腺相关病毒衣壳蛋白，并可有效用于Western blotting和细胞免疫荧光分析，为后续深入研究AAV9在基因治疗中的作用及AAV9载体开发提供了研究基础。
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