淫羊藿素抑制外泌体介导的黑色素瘤肺转移及机制初探

作者：屠书梅; 刘玉萍; 陈彦^*

来源：药学学报, 2021, 56(03): 778-785.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2020-1317

• 淫羊藿素
• 外泌体
• 黑色素瘤
• 肿瘤转移
• STING

本研究从体内外考察淫羊藿素(icaritin, ICT)对外泌体(exosomes, Exo)诱导的小鼠黑色素瘤B16BL6细胞肺转移的影响,并探讨其潜在分子机制。收集B16BL6细胞培养上清液,超速离心法提取Exo,使用透射电镜和Western blotting对Exo进行表征, BCA法对Exo总蛋白进行定量分析。细胞划痕实验考察ICT对Exo诱导的B16BL6细胞迁移能力的影响。建立C57BL/6小鼠黑色素瘤实验性转移模型,动物实验获得南京中医药大学伦理委员会的同意, H&E染色考察ICT体内抑制Exo介导的黑色素瘤转移作用。ELISA及免疫荧光检测转移组织中促炎因子白细胞介素6 (interleukin-6, IL-6)、S100钙结合蛋白A8/A9复合物(S100 calcium-binding protein A8/A9 complex,S100A8/A9)、血清淀粉样蛋白A (serum amyloid A, SAA)及纤连蛋白(fibronectin)的表达。免疫组化及Western blotting检测ICT对Exo诱导的转移组织相关蛋白干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene, STING)、磷酸化STING (p-STING)、TANK结合激酶1 (TANK-binding kinase 1, TBK1)和磷酸化的TBK1 (p-TBK1)的表达情况。结果表明,所提取的外泌体粒径为(149.33±2.68) nm、多分散系数为(0.192±0.02)、zeta电位为(-32.22±0.50) mV,电镜下呈现茶托样双层膜结构,测得蛋白浓度为(838.66±62.14)μg·mL-1。ICT浓度为5、10和20μmol·L-1时,能够抑制Exo诱导的B16BL6细胞迁移。ICT能够抑制Exo介导的黑色素瘤肺转移,抑制肺组织中促炎因子S100A8/A9、SAA和IL-6的表达,能够抑制转移肺组织的p-STING和p-TBK1的表达。本研究结果表明, ICT能够明显抑制Exo诱导的肿瘤转移,且与STING通路的失活有关。

• 单位
  江苏大学; 南京中医药大学; 江苏省中医药研究院