YPS1/YPS2失活改进酿酒酵母An-α菌株β-葡萄糖苷酶分泌表达

作者：郭敬涵; 陆海燕; 洪解放; 贾玉蝶; 邹少兰^*

来源：微生物学通报, 2021, 48(12): 4485-4495.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.210328

• YPS1/YPS2基因失活
• 酿酒酵母An-α
• β-葡萄糖苷酶
• 分泌表达

【背景】工业酵母菌株的蛋白质表达通常存在表达量低、分泌效率低的问题。【目的】考察失活Yapsin蛋白酶Yps1p和Yps2p对β-葡萄糖苷酶在酿酒酵母An-α菌株中表达的影响。【方法】利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,首先构建得到未折叠蛋白响应(Unfolded Protein Response,UPR)指示菌株An-α(leu2::UPRE-lac Z)即An-αL,然后分别失活其YPS1和YPS2基因,导入以YEplac195为载体的β-葡萄糖苷酶表达质粒(简称BG),进行生长和酶活分析评价。【结果】菌株An-αL的YPS1和YPS2基因失活对其在酵母浸出粉胨葡萄糖(Yeast Extract Peptone Dextrose,YPD)培养基中的生长未造成明显的不利影响;导入质粒BG后将在酵母浸出粉胨纤维二糖(Yeast Extract Peptone Cellobiose,YPC)培养基中生长的最大OD600分别提高了21.9%和7.4%;最大总酶活值为0.087 5和0.068 6 U/(m L·OD600),是对照菌株相应值的2.268倍和1.778倍;分泌比例提高了19.4%和22.2%;β-葡萄糖苷酶表达水平与β-半乳糖苷酶酶活水平所代表的UPR信号响应值之间呈现良好的相关性。【结论】YPS1和YPS2基因失活有助于改进酿酒酵母An-α菌株中β-葡萄糖苷酶的分泌表达。

• 单位
  天津大学