去甲斑蝥素对高糖刺激的HK-2细胞FN,Col Ⅳ和TGF–β1 mRNA及蛋白表达的影响

作者：陈琼; 李瑛; 罗俊辉; 杨阳; 李军; 孙林; 肖力; 许向青; 彭佑铭; 刘伏友

来源：中南大学学报(医学版), 2012, 37(03): 278-284.

• 去甲斑蝥素
• 纤粘连蛋白
• 胶原Ⅳ
• 转化生长因子-β1

目的:观察去甲斑蝥素(NCTD)对高糖刺激的HK-2细胞外基质和TGF-β1表达的影响。方法:常规培养HK-2细胞,无血清DMEM培养基同步培养24 h,细胞分为正常葡萄糖组(C,D-glucose 5.5 mmol/L)、甘露醇对照组(M,5.5 mmol/L D-glucose+24.5 mmol/L mannitol)、高糖组(HG,30 mmol/L D-glucose)、高糖+NCTD干预组(30 mmol/L D-glucose+0.5~40 mg/L NCTD)。台盼蓝排斥实验检测NCTD对高糖刺激的细胞毒性。MTT法检测NCTD对高糖刺激的细胞增殖的影响。收集培养6,24,48 h后细胞总RNA及蛋白,用RT-PCR检测细胞FN,ColⅣ和TGF-β1 mRNA的表达,采用Western印迹检测FN,ColⅣ和TGF-β1蛋白的表达。结果:不同浓度NCTD作用72 h后,浓度超过5 mg/L的NCTD对高糖环境下的HK-2细胞有明显的毒性。RT-PCR和Western印迹结果显示:30 mmol/L D-葡萄糖可引起HK-2细胞FN,ColⅣ和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的升高(P<0.05),而5 mg/L NCTD可抑制高糖刺激的FN,ColⅣ和TGF-β1的表达(P<0.05)。相同渗透浓度的D-甘露醇组对上述指标均无影响(P>0.05)。结论:NCTD能下调HK-2细胞FN,ColⅣ及TGF-β1的表达。

• 单位
  中南大学; 中南大学湘雅二医院; 同济大学