通用多重不对称PCR结合基因芯片实现下呼吸道病原菌及耐药基因快速检测

作者：刘俊杰; 谢海宇; 张艳妮; 陈桂柳; 何小维; 王羽^*

来源：检验医学与临床, 2023, 1-10.

• 下呼吸道感染
• 多重不对称聚合酶链反应
• 基因芯片
• 快速检测

目的建立一种基于通用多重不对称聚合酶链反应（PCR）结合基因芯片的下呼吸道病原菌及耐药基因检测方法，同步实现6种下呼吸道常见病原菌（大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌）和两种碳青霉烯酶基因（blaKPC、blaVIM）快速检测。方法针对待检病原菌及耐药基因的保守序列设计特异性引物与探针，并制备相应的基因芯片。优化多重PCR反应体系和杂交参数，分析其特异度、灵敏度，并通过临床标本进行方法应用评价。结果本研究建立的检测方法特异性强、稳定性好，能在4h内特异性地鉴别单一或多重靶标。大肠埃希菌纯培养物的检测灵敏度为10~(4)copy/mL，鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌及碳青霉烯酶基因（blaKPC、blaVIM）检测灵敏度均为10~(3)copy/mL，金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌检测灵敏度均为10~(2)copy/mL，与产酸克雷伯菌、黏质沙雷菌、奇异变形杆菌、表皮葡萄球菌、唾液链球菌、流感嗜血杆菌等6种病原菌无交叉反应。结论基于通用多重不对称PSR结合基因芯片的下呼吸道病原菌及耐药基因检测方法特异性强、灵敏度高，为快速、灵敏地鉴定下呼吸道病原菌及耐药基因提供了一种有效的检测手段。

• 单位
  广州万孚生物技术股份有限公司; 食品科学与工程学院; 广州再生医学与健康广东省实验室; 华南理工大学