冬虫夏草调控PERK-eIF2α信号通路抑制香烟烟雾提取物刺激下的人支气管上皮细胞凋亡研究

作者：刘玉; 谢纬; 祝庆华; 李敏芳; 唐明文; 陈生

来源：中国中医急症, 2021, 30(10): 1696-1700+1728.

DOI：10.3969/j.issn.1004-745X.2021.10.002

• 慢性阻塞性肺疾病
• 冬虫夏草
• A549细胞
• 炎症
• 细胞凋亡

目的观察冬虫夏草对慢性阻塞性肺疾病细胞模型的内质网应激(ERS)信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核起始因子2α(eIF2α)和细胞凋亡的影响。方法用香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人肺泡上皮细胞(A549)制作COPD细胞模型,MTT法测定CSE最佳干预浓度和时间,孵育不同质量浓度的虫草菌液(10、50、100、200 mg/L),MTT法检测不同质量浓度冬虫夏草和CSE干预细胞24 h后的存活率,根据实验结果确定冬虫夏草最佳干预质量浓度。随后将A549细胞分为空白对照组、CSE组、冬虫夏草组。空白组加入培养基,CSE组加入2%CSE,冬虫夏草组加入虫草菌液(100 mg/L)和2%CSE。共作用24 h后采用Hoechst 33342染色和Annexin V-FITC/PI流式检测各组细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测PERK、pPERK、eIF2α、p-eIF2α、凋亡相关蛋白Bcl-2和BAX水平。结果细胞存活率与CSE呈浓度、时间依赖性负相关;除200 mg/L的虫草菌液外,余不同质量浓度的虫草菌液对A549细胞无明显毒性;与CSE组比较,虫草菌液100 mg/L组显著提高细胞存活率;与空白组比较,CSE组的细胞凋亡率升高(P <0.01),且染色质凝集,核萎缩,凋亡小体增多,与CSE组比较,冬虫夏草组细胞凋亡率降低(P <0.01),且染色质凝集,核萎缩和凋亡小体较少;与空白组比较,CSE组p-PERK、p-eIF2α、Bax和Bcl-2的表达增多(P <0.01),Bax表达降低;与CSE组比较,冬虫夏草组p-PERK、p-eIF2α、Bcl-2的表达减少,Bax表达升高(P <0.01)。结论冬虫夏草通过抑制PERKeIF2α信号通路过度激活减轻内质网应激反应从而减少细胞凋亡,最终发挥对细胞的保护作用。

• 单位
  广州中医药大学; 深圳市中医院