黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA在PK15细胞中的分泌表达

作者：邹娴; 张茂; 许惠; 林纯; 贺晓燕; 刘德武; 蔡更元; 吴珍芳

来源：生物技术通报, 2011, (08): 192-197.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2011.08.036

• 黑曲霉
• β-甘露聚糖酶
• 重叠延伸PCR
• PK15细胞 Aspergillus niger β-mannanase Overlap extension PCR PK15 cells

通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSmanA。重组质粒经过PCR、酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且读码框完全正确。在脂质体介导下将pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达,通过RT-PCR方法证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测酶活性得到β-甘露聚糖酶基因酶活性为14.5 IU/mL。

• 单位
  广东省农业科学院畜牧研究所; 华南农业大学