鸡毒支原体磷酸甘油酸变位酶的亚细胞定位及免疫原性分析

作者：赵宇馨; 祁晶晶^*; 尚原冰; 李浩然; 刘婷; 王宇; 王少辉; 田明星; 高崧^*; 于圣青^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-9.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230322.002

• 鸡毒支原体
• 磷酸甘油酸变位酶
• 原核表达
• 亚细胞定位
• 免疫原性

【背景】鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum， MG)感染鸡、鸭、鹅等多种禽类，引起慢性呼吸道疾病，导致产蛋率下降、生长发育受阻，给养禽业造成的经济损失大。磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycerate mutase， PGM)是一种参与糖酵解和葡萄糖异生的重要酶，研究表明PGM在一些病原菌的膜表面分布，并能结合宿主细胞的胞外基质蛋白，在病原菌致病过程中发挥重要作用，而MG中的PGM蛋白(MGPGM)相关方面的研究少见报道。【目的】对MGPGM进行原核表达、亚细胞定位检测及免疫原性分析，为进一步探索MGPGM的生物学功能奠定基础。【方法】通过PCR扩增MG的pgm全基因序列(MGpgm)，连接表达载体pET-28a (+)并进行原核表达及纯化，获得重组MGPGM (rMGPGM)蛋白；制备抗rMGPGM兔血清，提取MG菌的全菌蛋白、膜蛋白以及胞浆蛋白，与抗rMGPGM兔血清进行Western blot反应，分析其在MG菌中的亚细胞定位情况；抗rMGPGM兔血清与MG菌进行悬浮免疫荧光分析，测定PGM在MG的膜表面定位情况；用MG Rlow感染阳性鸡血清与rMGPGM蛋白进行Western blot反应，分析其免疫原性。【结果】在大肠杆菌BL21中成功表达rMGPGM蛋白，制备的兔抗rMGPGM血清抗体效价为102400，Western blot 显示抗rMGPGM的兔血清能与MG全菌蛋白、膜蛋白以及胞浆蛋白反应，且MGPGM不仅在胞浆中大量分布，也少量分布在膜蛋白组分中；悬浮免疫荧光试验进一步证实MG的细胞膜表面有PGM蛋白分布；且MG感染血清与rMGPGM蛋白具有显著反应条带，说明rMGPGM具有较好的免疫原性。【结论】文章证实了MGPGM蛋白在MG的膜表面分布，同时还具有较好的免疫原性，为进一步研究MGPGM蛋白在MG致病过程中的作用提供参考。

• 单位
  扬州大学; 中国农业科学院上海兽医研究所; 锦州医科大学