一种新颖的毕赤酵母酸性蛋白酶基因的克隆和异源表达以及酶学性质研究

作者：马纳纳; 徐冬冬; 黄伟谦; 游子娟; 罗晓春

来源：广东农业科学, 2015, 42(12): 141-146.

DOI：10.3969/j.issn.1004-874X.2015.12.028

• 毕赤酵母
• 重组酵母酸性蛋白酶
• 酶学性质
• 蛋白水解

采用基因克隆方法获得酸性蛋白酶基因,在毕赤酵母KM71表达系统中进行表达,并将重组酵母酸性蛋白酶rPrA经过浓缩后研究其酶学性质,初步探究了rPrA对大豆蛋白和酪蛋白的水解情况.结果表明:经过异源表达后的重组毕赤酵母酸性蛋白酶分子量约为44 ku,在pH3.0的发酵条件下酶活最高,可达46.92U/mL.该酸性蛋白酶的最适pH值为3.0,最适温度为35℃.Mn2+对该酶活性有激活作用,多种金属离子对该酶有抑制作用;0.1 mmol/L的Pepstain A即可完全抑制酶活,说明此重组酶的活性中心有天冬氨酸残基.对大豆蛋白和酪蛋白的初步水解试验可知,当E/S为4 000 U/g时,此重组酶对大豆分离蛋白和酪蛋白的水解度分别为9.0％和8.34％.优化发酵条件以及与多种蛋白酶进行复配,该重组蛋白酶将在蛋白水解中有很好的应用前景,有望应用到畜禽饲料加工行业.

• 单位
  华南理工大学