实时荧光定量PCR快速检测无菌性体液革兰阳/阴性细菌感染

作者：谢思露; 向瑶; 杨朝国^*

来源：现代预防医学, 2019, 46(08): 1468-1472.

• 实时荧光定量聚合酶链反应
• 细菌
• 16S rRNA基因

目的探讨将实时荧光定量PCR(qPCR)检测细菌16S rRNA基因用于快速判断无菌性体液革兰阳/阴性细菌感染,并评价其分析性能。方法以细菌16S r RNA基因为目标设计通用引物、通用探针及革兰阴性(GN)菌探针,对14种标准菌株、20种临床菌株、白色念珠菌、乙型肝炎病毒(HBV)、人基因组及阴性对照进行qPCR检测,评价该方法引物和探针的通用性和特异性及检测限。以104 cfu/ml菌悬液、阴性对照的循环域(Ct)值99%置信区间下限分别作为尿路、其他无菌性体液细菌感染判定的分界值。用271例临床无菌性体液标本评价qPCR法的临床效能。结果通用探针-qPCR,所有实验菌株检测为阳性。GN探针-qPCR,所有实验革兰阴性菌株检测为阳性。通用探针的检测限为1×101～1×102cfu/ml。GN探针的检测限可低至1.0×101 cfu/ml。判定尿路、其他无菌性体液细菌感染的分界值分别为23.76、29.37。结论应用细菌16S r RNA基因通用探针和GN探针的qPCR方法通用性好、特异性强、检测限低,可快速检测临床无菌性体液常见细菌感染,为临床提供准确、可靠的病原学诊断依据。

• 单位
  成都中医药大学