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摘要
RpoN又称σ54，参与调控细菌多种生物过程。为探究固氮菌DX120E中σ54因子的生物学作用机制，本研究从NCBI数据库中获取DX120E rpoN基因的CDS区，对其进行生物信息学分析，通过同源重组技术构建rpoN基因敲除载体和回补载体。结果表明：rpoN基因编码477个氨基酸，理论蛋白质分子量53.93 kD，理论等电点为4.64，无跨膜结构域，无信号肽，是亲水性蛋白，亚细胞定位于细胞质中，二级结构预测结果显示含有56.6%的α-螺旋，31.45%的无规则卷曲，推测rpoN位于细胞质内，与RNA聚合酶结合，识别启动子的特定序列，激活转录。成功构建敲除载体和回补载体，获得基因敲除突变菌株ΔrpoN和回补菌株C-rpoN，敲除菌株中固氮酶铁蛋白编码基因nifH表达量下调，推测DX120E中rpoN调控nifH基因，参与的氮代谢相关途径。本研究为rpoN基因的功能研究提供基础材料。
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单位广西大学; 广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所; 农业部
