MIR6766的抗百草枯功能及其分子机制初探

作者：李娜; 陈晨; 董研博; 王健; 李山虎^*

来源：生物技术通讯, 2020, 31(06): 714-719.

• 百草枯
• CRISPR/Cas9
• MIR6766
• 细胞色素P450氧化还原酶

目的:利用人肺癌细胞系A549研究对百草枯的潜在耐药基因及可能的分子机制。方法:使用CRISPR/Cas9全基因组敲除文库,在人肺癌细胞系A549中筛选出抗百草枯基因MIR6766和POR,将它们的sgRNA序列与CRISPRLentiV2载体连接,分别构建敲除MIR6766、POR的A549细胞系。Q-PCR验证MIR6766敲除情况,CCK8法验证百草枯耐药性,Western印迹验证MIR6766与POR的关系。结果:筛选出抗百草枯基因MIR6766,构建了MIR6766敲除细胞系。与对照细胞相比,MIR6766敲除细胞和POR敲除细胞均表现出明显的抗百草枯作用。MIR6766敲除的细胞系中POR基因的mRNA与蛋白表达水平降低。结论:MIR6766表达水平下降可能诱导肺癌细胞的抗百草枯表型,其可能机制为间接降低了POR的表达水平,进而减弱百草枯对细胞的毒性作用。这些工作为进一步研究MIR6766对百草枯抗性作用的分子机制奠定了基础。