NEP1-40基因慢病毒载体构建及鉴定

作者：袁海峰; 宋跃明; 刘浩; 周春光; 孔清泉; 刘立岷; 龚全

来源：中国修复重建外科杂志, 2012, 26(02): 177-181.

• NEP1-40
• 神经再生
• 慢病毒载体
• 293T细胞 Nogo extra cellular peptide residues 1-40 Nerve regeneration Lentivirus vector 293T cells

目的构建NEP1-40(Nogo extra cellular peptide residues 1-40)基因慢病毒表达载体,为后续转染目的细胞奠定基础,并实现在细胞中高效、稳定表达。方法从含有NEP1-40基因的cDNA文库中,利用PCR方法钓取NEP1-40基因编码区片段。将目的基因与酶切线性化的载体pGC-FU进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞。对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确的克隆即为构建成功的目的质粒。将构建成功的目的质粒和两种辅助包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒,荧光显微镜下观察慢病毒转染293T细胞后荧光表达情况...

• 单位
  四川大学华西医院; 宁夏医科大学