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摘要
目的建立一种简便的大鼠主动脉血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)分离纯化及培养方法。方法无菌条件下分离获得大鼠主动脉,在眼科显微器械的辅助下翻转暴露血管内膜。按处理方式的不同,将获得的主动脉血管段分为消化压片法组、单纯消化法组和单纯压片法组,并进行对应的处理和培养,通过倒置相差显微镜观察VECs形态,免疫荧光法鉴定VECs的细胞标记物。结果消化压片法组在接种后48～72h即有VECs自血管段中迁移出,原代细胞约10～11d可达到近融合状态,子代细胞生长速度加快,5d后达到融合状态,呈典型的"铺路石"样特征。相对于其他两组,消化压片法组VECs的迁移速度快、细胞数量多。免疫学鉴定显示细胞标志物Ⅷ因子、vWF和CD31的阳性率高达99%。所培养的VECs传代培养至第10代,未见明显的细胞形态特征变化,免疫荧光鉴定至第8代,未见明显的细胞免疫特征变化。结论本研究成功建立了一种简单经济的大鼠主动脉VECs分离、纯化和培养方法。
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