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摘要
本研究使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)和干式试剂技术, 研发一种可以常温存储的结核分枝杆菌快速检测试剂。LAMP核酸扩增技术基于4或6条特异性引物, 依靠链置换DNA聚合酶, 使DNA在恒定温度下不断合成。所研LAMP技术反应体系使用实时荧光检测方法在20 min内检出结核分枝杆菌IS6110靶基因, 且灵敏度接近PCR法, 但精密度不及PCR法(LAMP法变异系数18.9%, PCR法变异系数3.4%), 故LAMP法更适合定性检测。LAMP体系对脑膜炎双球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、风疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道腺病毒(3 型)、呼吸道腺病毒(7 型)、呼吸道合胞病毒B和副流感病毒2型等10种病原体均无扩增, 表现出较好的特异度。在此基础上, 使用烘干和冻干技术, 研发干式LAMP技术反应试剂。干式试剂在50 ℃环境下存储10 d性能无衰减, 等效常温(25 ℃)可保存6个月以上。在临床样本测试中, 干式试剂可20 min内有效检出结核分枝杆菌的核酸。综上, 本文研发的常温存储快速检测试剂搭配等温扩增仪可对结核分枝杆菌进行快速鉴定。
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