沉默c-myc重组腺病毒载体的构建

作者：王栋琪; 刘淼; 王民; 张银刚

来源：中国修复重建外科杂志, 2008, (08): 969-973.

• 重组腺病毒
• c-myc
• 短发夹RNA
• 骨肉瘤
• 基因沉默 Recombinant adenovirus c-myc Short hairpin RNA Osteosarcoma Gene silencing

目的设计、构建并筛选出转染至人骨肉瘤细胞系OS-9901,对c-myc沉默效果最佳的复制缺陷型重组腺病毒质粒pAd-c-myc-短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)包装出表达c-myc-shRNA的重组腺病毒,并测定其滴度。方法设计有shRNA结构的3对单链寡核苷酸(ssoligos),经变性退火为双链寡核苷酸(dsoligos),插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后,经LipofectamineTM2000阳离子脂质体介导入人骨肉瘤细胞系OS-9901,采用RT-PCR筛选对c-myc沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒行...

• 单位
  西安交通大学; 第一附属医院骨科