融合蛋白TRX-hJagged1原核表达载体的构建及其在BL21中的表达

作者：李国辉; 范玉贞; 黄斯勇; 刘强; 尹郸丹; 刘利; 陈任安; 郝淼旺; 梁英民

来源：中国实验血液学杂志, 2014, 22(03): 807-811.

• Notch
• Jagged1
• 融合蛋白
• 原核表达

本研究旨在构建原核表达载体并原核表达Notch配体Jagged1。构建不同长度但均包含DSL区的原核表达载体pET-hJagged1,将构建重组原核表达载体pET-hJagged1转化大肠杆菌BL21后,予以IPTG诱导,优化诱导条件,使目的蛋白TRX-hJagged1在上清中有较大量表达。诱导工程菌并以镍柱纯化对可溶性的目的蛋白进行纯化。结果表明,成功构建了原核表达载体pET-hJagged1(BglⅡ)、pET-hJagged1(HindⅠ)及pET-hJagged1(StuⅠ),但仅pET-hJagged1(StuⅠ)表达可溶性的TRX-hJagged1。通过镍柱纯化获得了较单一的TRX-Jagged1蛋白,Western Blot证实了其为目的蛋白。结论:成功地构建了原核表达载体pET-hJagged1,并在原核表达系统表达了TRX-Jagged1融合蛋白,为进一步研究Jagged1在淋巴造血系统中的作用奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学; 唐都医院