细胞穿透肽Penetratin修饰的眼用脂质体的构建与体外评价

作者：徐楠; 张姝月; 丁雪鹰^*

来源：上海交通大学学报 (医学版), 2021, 41(05): 595-602.

• 细胞穿透肽
• 脂质体
• 康柏西普
• 眼底新生血管疾病
• 滴眼给药

目的·构建一种细胞穿透肽Penetratin修饰的眼用脂质体(Penetratin-modified liposome,Pen-Lip),并初步评价其通过滴眼给药治疗眼底新生血管疾病的适用性。方法·通过二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-N-马来酰亚胺-聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000-Mal)和Penetratin的加成反应合成共聚物DSPE-PEG2000-Pen,再通过薄膜分散法制备Pen-Lip。利用细胞摄取实验确定修饰脂质体的最佳Penetratin比例。用纳米粒度电位仪测定Pen-Lip的平均粒径、Zeta电位和多分散系数(polydispersity index,PDI),用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察Pen-Lip的形态。采用离心法测定Pen-Lip装载康柏西普的包封率和载药量。将Pen-Lip在PBS或含50%胎牛血清PBS中静置48 h,通过粒径变化和TEM下形态考察Pen-Lip的稳定性。采用CCK-8法检测Pen-Lip对人源角膜上皮细胞(human corneal epithelial cell,HCEC)和人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,ARPE-19)的细胞毒性,利用激光共聚焦显微镜观察ARPE-19对Pen-Lip的摄取情况。使用扩散池装置评估Pen-Lip对离体兔角膜的渗透能力,计算表观渗透系数Papp,通过角膜水合值评价载有康柏西普的Pen-Lip对角膜组织的毒性。结果·修饰脂质体的最佳Penetratin比例为3%。PenLip的平均粒径为(148.07±3.51) nm,Zeta电位为(5.66±0.91) mV,PDI为0.227±0.045。TEM结果显示其呈外表光滑的球形结构。Pen-Lip的包封率为(44.06±3.70)%,载药量为(2.84±0.24)%。Pen-Lip在PBS和含50%胎牛血清PBS中静置48 h后粒径无明显变化,TEM显示分散均匀,表明其稳定性较好。在15～500μg/mL范围内时,Pen-Lip对HCEC、ARPE-19无明显细胞毒性。与未修饰脂质体相比,ARPE-19对Pen-Lip的摄取能力显著提高(P=0.000)。离体兔角膜渗透实验中,Pen-Lip的Papp显著大于未修饰脂质体(P=0.000);载药Pen-Lip处理后的离体兔角膜的水合值与未处理组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论·Pen-Lip在体外具有良好的稳定性、生物相容性、角膜透过能力,且能够被视网膜细胞摄取,是一种潜在的能够通过滴眼给药治疗眼底新生血管疾病的药物递送系统。

• 单位
  上海交通大学