基于Src/VEGF轴探究补肾活血汤治疗乳腺癌骨转移的作用机制

作者：胡玉蝶; 王晓丽; 焦方敏; 杨争; 袁博; 胡金辉^*

来源：湖南中医药大学学报, 2023, 43(01): 59-68.

• 乳腺癌
• 骨转移
• 骨破坏
• 补肾活血汤
• Src/VEGF轴
• 实验验证
• 作用机制

目的 探讨Src/VEGF信号通路对补肾活血汤治疗乳腺癌骨转移的影响及作用机制。方法 通过TCMSP、GeneCards数据库，挖掘出补肾活血汤治疗乳腺癌骨转移的潜在靶点，并将靶点进行拓扑分析和GO、KEGG富集分析，对拓扑分析排第一的关键核心靶点进行实验验证。15只裸鼠随机分为对照组、模型组、补肾活血汤组，5只/组，模型组、补肾活血汤组通过胫骨注射人乳腺癌4T1-luc细胞构建裸鼠乳腺癌骨转移模型，补肾活血汤组按照36.67 g/（kg·d）予以补肾活血汤灌胃，对照组、模型组按照0.01 mL/（g·d）予以生理盐水灌胃，连续给药14 d。监测并记录裸鼠体重变化；HE染色法检测裸鼠骨组织病理学变化；X线、微CT检测裸鼠胫骨情况；胫骨组织Trap染色观察破骨细胞；Western blot检测裸鼠胫骨组织细胞原癌基因（Src）、血管内皮生长因子抗体（vascular endothlial growth factor, VEGF）、金属基质蛋白1(matrix metalloproteinase 1, MMP1)蛋白表达水平；免疫组化法检测裸鼠胫骨组织SRC、VEGF、MMP1、活化T细胞核因子抗体（nuclear factor of activated T-Cells 1, NFATc1）基因表达水平。结果 补肾活血汤治疗乳腺癌骨转移潜在靶点共949个，其中核心靶点15个，关键核心靶点为Src;KEGG富集分析显示，补肾活血汤可能调控197个信号通路；GO富集分析得到生物过程（biological process, BP）605个条目、细胞组成（cellular component, CC）52个条目、分子功能（molecular function, MF)117个条目。与对照组相比，模型组裸鼠体重明显减轻（P<0.01）,HE染色可见大量肿瘤细胞和炎性细胞浸润，X线、微CT下观测胫骨骨破坏面积百分比显著增加（P<0.01）,Trap染色可见成熟破骨细胞数量明显增加（P<0.01），胫骨组织Src、VEGF、MMP1、NFATc1表达水平显著升高（P<0.01）；与模型组相比，补肾活血汤组裸鼠体重明显增加（P<0.01），肿瘤细胞和炎性细胞浸润情况好转，X线、微CT下观测胫骨骨破坏面积百分比显著降低（P<0.05），成熟破骨细胞数量明显减少（P<0.05），胫骨组织SRC、VEGF、MMP1、NFATc1表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论 补肾活血汤治疗乳腺癌骨转移是多成分、多靶点、多通路共同作用的结果，其可能通过下调Src/VEGF轴及其下游MMP1、NFATc1基因的表达，抑制破骨细胞活化、改善骨破坏，发挥治疗乳腺癌骨转移的作用。

• 单位
  湖南中医药大学; 湖南中医药大学第一附属医院