通过两步离子交换层析建立保留HLA-A2二聚体构象的纯化方法

作者：杨敬; 翁秀芳; 梁智辉; 吴雄文^*

来源：华中科技大学学报(医学版), 2020, 49(03): 301-311.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2020.03.010

• 两步离子交换层析
• HLA-A2二聚体
• 纯化方法
• 空间构象

目的建立两步离子交换层析纯化方法以获得浓缩的高纯度HLA-A2二聚体。方法收集转染有HLA-A2-IgG1 Fc重组基因的7A2D细胞上清,并进行ELISA和Western blot鉴定7A2D细胞表达的HLA-A2二聚体,检测其浓度;应用SPA亲和层析和两步法离子交换层析技术分别纯化HLA-A2二聚体,并比较2种方法纯化HLA-A2二聚体的效率。结果 7A2D细胞可表达正确构象的HLA-A2二聚体,Western blot检测显示融合蛋白的分子量与预期大小一致,7A2D细胞上清中HLA-A2二聚体的浓度为4.4μg/mL。SPA亲和层析法中pH3.0的洗脱条件使大部分的HLA-A2二聚体发生了变性反应,纯化后构象正确的HLA-A2二聚体纯度为(10.4±1.3)%,回收率仅为(7.3±1.1)%;两步离子交换层析后HLA-A2二聚体纯度为(72.9±4.6)%、回收率为(51.9±6.5)%,均显著高于SPA亲和层析法。结论建立了一种纯化条件相对温和的两步法离子交换层析纯化方法,经过该方法制备获得的高纯度与较高浓度的HLA-A2二聚体可保持正确的空间构象,达到纯化与浓缩的目的。

• 单位
  基础医学院; 华中科技大学同济医学院