脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定

作者：朱剑; 许期年; 王秀云; 左剑玲; 周岱; 王中; 伏林山; 陈旭仁

来源：山东医药, 2012, (26): 10-13.

• 颅内肿瘤
• 胶质瘤
• 异柠檬酸脱氢酶1
• 双顺反子
• 质粒
• 基因突变 intracranial tumor
• gliomas
• isocitrate dehydrogenase 1
• bicistron
• plasmid
• gene mutation

目的以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDH1R132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段,并在5'末端引入3×Flag标签;通过PCR介导的定点突变法,以pCMV-sports6-hIDH1为模板,扩增hIDH1R132H基因片段,并在3'末端引入3×Flag标签;通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3.1(+)骨架;转化大肠杆菌后挑取阳性克隆,提取质粒进行PCR检测及基因序列测定。结果 PCR...

• 单位
  苏州大学附属第一医院; 盐城市第一人民医院