ADAM28 shRNA干扰载体的构建及对人牙周膜干细胞的抑制效应

作者：赵征^*; 邱海燕; 傅兰; 李杰

来源：上海口腔医学, 2020, 29(05): 476-481.

DOI：10.19439/j.sjos.2020.05.006

• 金属蛋白酶解离素28
• shRNA
• 干扰载体
• 人牙周膜干细胞

目的 :探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,HPDLSC)内ADAM28基因表达的抑制作用,为先天性牙根发育不全疾病的基因治疗提供实验依据。方法:设计合成4对特异性shRNA干扰片段,与pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建、鉴定ADAM28 shRNA干扰载体并转染HPDLSC 48 h后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹分析检测抑制效率。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果:酶切和测序鉴定证明双链shRNA正确插入表达载体pGPU6/GFP/Neo,重组干扰载体构建成功并高效转染HPDLSC。QRT-PCR和Western印迹检测显示,pGPU6/GFP/Neo-ADAM28-shRNA1-4均有显著的抑制效率,shRNA1的抑制效率最高;ADAM28-shRNA1-4组与未转染组、阴性对照组比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:ADAM28 shRNA干扰载体可有效抑制HPDLSC内ADAM28的基因表达。

• 单位
  青岛市口腔医院