解耦联蛋白2在漆黄素保护肾缺血/再灌注损伤中的作用及机制

作者：杨雨雪; 杨永健^*

来源：中华高血压杂志, 2020, 28(06): 523-531.

DOI：10.16439/j.cnki.1673-7245.2020.06.009

• 肾缺血/再灌注损伤
• 漆黄素
• 解耦联蛋白2
• 细胞凋亡
• 氧化应激

目的研究解耦联蛋白2(UCP-2)在漆黄素保护肾缺血/再灌注损伤中的作用及机制。方法 6～8周的雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(n=6)、缺血/再灌注组(n=6)、缺血/再灌注+漆黄素组(n=6)。将人肾小管上皮(HK-2)细胞分别进行缺氧/复氧及缺氧/复氧+漆黄素处理(n=3)。检测血肌酐、尿素氮水平。苏木素-伊红及过碘酸雪夫染色观察肾脏病理损伤并统计损伤指数;二氢乙啶超氧化物阴离子探针检测组织氧化应激水平。检测HK-2细胞丙二醛水平以及还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)以评估细胞内氧化应激水平;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)评估细胞凋亡情况;亲脂性羰花青荧光探针(JC-1)检测线粒体膜电位;实时荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)检测解耦联蛋白2(UCP-2)mRNA表达水平;免疫印迹检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、前体和激活型半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)以及UCP-2的蛋白表达水平。结果与缺血/再灌注组相比,缺血/再灌注+漆黄素组的血肌酐[(48.7±4.4)比(162.1±4.3)μmol/L,P<0.05]、尿素氮[(13.7±0.6)比(25.6±0.6)mmol/L,P<0.05]以及损伤指数(2.0±0.3比3.3±0.2,P<0.05)明显降低,凋亡细胞明显减少(P<0.05),Bcl-2表达升高、BAX与激活型Caspase-3表达降低(均P<0.05)。二氢乙啶染色提示,与缺血/再灌注组相比,缺血/再灌注+漆黄素组氧化应激水平明显降低(P<0.05)。在HK-2细胞中,与缺氧/复氧处理相比,缺氧/复氧+漆黄素处理的细胞中丙二醛水平明显下降(P<0.05)、GSH/GSSG上升(P<0.05)、线粒体膜电位上升(P<0.05)。在HK-2细胞中,与缺氧/复氧处理相比,给予缺氧/复氧+漆黄素处理的细胞UCP-2蛋白(0.7±0.1比0.5±0.1,P<0.05)与mRNA(0.7±0.2比0.2±0.1,P<0.05)的相对表达量均上调;动物模型中,与缺血/再灌注组相比,缺血/再灌注+漆黄素组UCP-2蛋白(0.8±0.1比0.4±0.2,P<0.05)与mRNA表达量(0.8±0.2比0.2±0.1,P<0.05)上升。结论漆黄素保护肾缺血/再灌注损伤导致的线粒体功能障碍与UCP-2的表达上调有关。

• 单位
  西南交通大学