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摘要
目的:探讨去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)在糖尿病冠状动脉(冠脉)支架内再狭窄(ISR)中的作用。方法:在17头糖尿病猪和10头正常猪的冠脉内置入雷帕霉素洗脱支架,6个月后行冠脉造影,留取发生和未发生ISR的冠脉组织,Western blot检测ADAM10表达水平。在人主动脉平滑肌细胞(HASMC)中感染ADAM10的过表达和敲减病毒,BrdU检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力。分别用低糖培养基、高糖培养基、晚期糖基化终末产物-牛血清白蛋白(AGE-BSA)、AGE-BSA+AGE受体(RAGE)抗体培养HASMC,实时定量RT-PCR和Western blot检测ADAM10表达水平。结果:在糖尿病组中,未发生ISR和发生ISR的冠脉组织中ADAM10的表达均高于非糖尿病组(3.36±1.27对2.11±2.05,10.48±4.72对6.72±1.36,P均<0.01)。在非糖尿病组和糖尿病组,发生ISR的冠脉组织中ADAM10的表达均高于未发生ISR的冠脉组织(P均<0.01)。BrdU实验显示,在低糖培养基和高糖培养基中,ADAM10过表达的HASMC增殖均明显高于转染空载体的HASMC(2.25±0.07对1.87±0.08,2.47±0.10对2.07±0.10,P均<0.05);而ADAM10敲减的HASMC增殖均明显低于转染空载体的HASMC(1.34±0.10对1.87±0.08,1.46±0.09对2.07±0.10,P均<0.05);ADAM10过表达和ADAM10敲减的HASMC在高糖培养基中的增殖均明显高于低糖培养基(P均<0.05)。细胞划痕实验显示,在低糖培养基和高糖培养基中,ADAM10过表达的HASMC迁移距离均明显大于转染空载体的HASMC[(1.02±0.12)mm对(0.65±0.04)mm,(1.26±0.06)mm对(0.78±0.06)mm,P均<0.05)],而ADAM10敲减的HASMC迁移距离均明显小于转染空载体的HASMC[(0.26±0.06)mm对(90.65±0.04)mm,(0.43±0.14)mm对(0.78±0.06)mm,P均<0.05)];ADAM10过表达和ADAM10敲减的HASMC在高糖培养基中的迁移距离均明显大于低糖培养基(P均<0.05)。与低糖培养基相比,高糖培养基和AGE-BSA中HASMC ADAM10 mRNA和蛋白的相对表达水平均明显升高(P均<0.05);与AGE-BSA相比,AGE-BSA+RAGE抗体中HASMC ADAM10 mRNA和蛋白的相对表达水平均明显降低(P均<0.05)。结论:ADAM10在糖尿病发生ISR的冠脉中表达显著升高,ADAM10高表达促进动脉平滑肌细胞增殖和迁移,高糖环境及AGE均可促进ADAM10的表达,ADAM10可能参与了糖尿病冠脉ISR的发生与发展。
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