蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的实时荧光定量PCR检测

作者：宋起萱; 浦艳飞; 余蓉培^*; 瞿素萍^*; 杨春梅; 吴丽芳; 汪国鲜; 阮继伟

来源：江苏农业科学, 2023, 51(15): 21-28.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2023.15.004

• 蝴蝶兰
• 建兰花叶病毒
• 齿兰环斑病毒
• 实时荧光定量PCR
• 病毒检测

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,简称CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,简称ORSV)是蝴蝶兰生产中的主要病毒病害，建立稳定、灵敏的检测体系是进行病毒早期检测和脱毒技术研究的前提。本研究首先对CymMV和ORSV的外壳蛋白(coat protein,简称CP)基因片段进行克隆和序列比对，随后设计特异性引物，分别构建2种病毒的RT-qPCR(real time quantitative PCR,简称RT-qPC)检测体系，并对云南地区20份样品进行检测。研究结果显示，CymMV和ORSV CP基因序列与其他地区分离物中这2种病毒的核苷酸序列相似性分别为97.92%～98.66%和99.12%～99.56%,其CP基因序列具有保守性。CymMV和ORSV在RT-qPCR体系中最低检出浓度分别为30.9、35.0 copies/μL,灵敏度较RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,简称RT-PCR)提高10倍。利用RT-qPCR体系对20份温室样品进行检测，CymMV阳性率为100%,ORSV阳性率为90%,阳性率均高于RT-PCR检测结果。本研究构建的CymMV和ORSV RT-qPCR检测体系将为蝴蝶兰病毒病早期监测和脱毒种苗的培育奠定基础。

• 单位
  云南省农业科学院花卉研究所; 云南大学