应用酵母双杂交系统筛选与TRF1相互作用的蛋白质

作者：王伟琼; 王冲; 刘延方; 郝倩倩; 马杰

来源：郑州大学学报(医学版), 2014, 49(02): 188-191.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2014.02.013

• 酵母双杂交
• TRF1
• 端粒
• 有丝分裂
• HeLa细胞

目的:应用酵母双杂交系统筛选与端粒重复序列结合蛋白1(TRF1)相互作用的蛋白质,探讨TRF1在HeLa细胞有丝分裂期的调控机制。方法:应用酵母双杂交技术,以pGBKT7-TRF1为诱饵质粒筛选人HeLa细胞cDNA文库,并对筛选结果进行测序及同源性分析。运用免疫共沉淀、体外沉降实验验证SAM68与TRF1是否能够相互结合。结果:酵母双杂交结果共发现5个可能与TRF1存在相互作用的蛋白,包括人SAM68蛋白、Cullin1蛋白、Plk1蛋白、Hsp70蛋白以及ATF5蛋白。体内免疫共沉淀实验和体外沉降实验证实SAM68能够与TRF1在体内与体外相互结合。结论:SAM68可能是一个新的TRF1结合蛋白,TRF1有可能参与了有丝分裂期的调控。

• 单位
  郑州大学第一附属医院