高磷通过SET8-shRNA调控AKT/Caspase-3通路促进血管平滑肌细胞凋亡

作者：刘兰; 张东雪; 朱荣芳; 梁向楠; 李晖; 张胜雷^*

来源：山西医科大学学报, 2021, 52(10): 1312-1318.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2021.10.011

• 血管平滑肌细胞
• SET8
• AKT
• Caspase-3
• β-甘油磷酸

目的探讨高磷通过SET8-shRNA调控AKT/Caspase-3通路促进大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)发生钙化的机制。方法将血管平滑肌细胞随机分为两组:正常组和高磷组(10 mmol/Lβ-甘油磷酸)。采用茜素红染色及钙含量检测血管平滑肌细胞钙化,采用实时荧光定量及Western blot检测SET8、AKT、Caspase-3 mRAN和蛋白表达情况。为验证SET8在细胞钙化中的作用,将大鼠VSMCs分为6组:正常组、空质粒组、SET8低表达组(转染SET8-shRNA质粒)、高磷组(10 mmol/Lβ-甘油磷酸)、空质粒+高磷组(高磷基础上转染SET8过表达的对照质粒)、SET8过表达+高磷组(高磷基础上转染SET8过表达质粒)。检测各组血管平滑肌细胞的钙化、凋亡及AKT、Caspase-3表达情况。为进一步验证AKT在VSMCs钙化中的作用,将血管平滑肌细胞分为3组:AKT抑制剂组(1μl DMSO+AKT抑制剂LY294002)、对照组(1μl DMSO)和正常组,检测AKT、Caspase-3 mRAN和蛋白表达。结果与正常组比较,高磷组细胞钙化结节增多,钙含量增加(P<0.05),STE8和AKT表达降低,Caspase-3表达升高(P<0.05)。与正常组和空质粒组比较,SET8-shRNA组细胞钙化和凋亡增多,AKT表达降低,Caspase-3表达升高(P<0.05);与高磷组和空质粒+高磷组比较,SET8过表达+高磷组细胞钙化和凋亡减少,AKT表达升高,Caspase-3表达降低(P<0.05)。与正常组和对照组比较,AKT抑制剂组AKT表达显著降低,Caspase-3表达显著升高(P<0.05)。结论高磷通过SET8-shRNA抑制AKT活化,进而促进Caspase-3表达,增加VSMCs凋亡,从而影响细胞钙化的发生。

• 单位
  河北医科大学第四医院