重组蛋白Cox7a2原核表达及鉴定

作者：陈亮; 辛钟成; 姜学军; 田龙; 袁亦铭; **; 宋卫东; 郭应禄

来源：中华男科学杂志, 2006, (09): 794-797.

DOI：10.13263/j.cnki.nja.2006.09.007

• Cox7a2
• 线粒体
• pGEX4T-1
• 重组
• 睾丸
• 小鼠

目的:从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7a2基因,构建pGEX4T-1-Cox7 a2载体,表达和鉴定重组蛋白。方法:应用RT-PCR方法从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞中克隆Cox7 a2,利用BamH I和EcoR I酶切位点把Cox7a2克隆到pGEX4T-1载体,酶切和测序鉴定后,诱导重组蛋白的表达,进行纯化后,利用蛋白免疫印迹进行鉴定。结果:从原代培养的小鼠睾丸Leyd ig细胞克隆到Cox7a2完整的编码序列,构建了pGEX4T-1-Cox7 a2载体,表达了预期相对分子质量的融合蛋白,并经免疫印迹检测鉴定。结论:成功克隆Cox7a2,表达纯化了其融合蛋白,为基因的功能研究奠定了前期基础。

• 单位
  北京大学第一医院; 中国科学院微生物研究所