紫檀芪对人乳头瘤病毒16整合感染宫颈上皮细胞系生长、凋亡和自噬的影响

作者：陈荃; 唐奕; 李华平; 陈教全; 彭丽倩; 杨日东; 邓蕙妍; 李振洁; 朱慧兰^*

来源：中华皮肤科杂志, 2021, 54(10): 861-868.

• 人乳头瘤病毒16
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 细胞周期
• 自噬
• 紫檀芪
• 永生化人宫颈上皮细胞

目的探讨紫檀芪对人乳头瘤病毒16(HPV16)整合感染宫颈上皮细胞(H8细胞)生长、凋亡和自噬的影响。方法紫檀芪与H8细胞共培养24 h和48 h, 使用CCK8法检测细胞增殖活性, 流式细胞仪检测H8细胞凋亡和细胞周期, 荧光显微镜观察MDC染色后细胞自噬形态学改变, Western印迹检测各组细胞周期相关蛋白(cyclinD1)、凋亡相关蛋白(caspase3、caspase9)、自噬相关蛋白(Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、ATG5、P62)、HPV致癌基因蛋白(E6、E7蛋白)的表达。采用单因素方差分析、重复测量方差分析和LSD-t检验分析组间差异。结果对照组(0)、25、50、75、100 μmol/L紫檀芪作用H8细胞48 h后, 各组细胞相对生长率(100.00% ± 1.56%、99.02% ± 4.97%、93.59% ± 2.01%、81.28% ± 4.90%、69.17% ± 7.56%)差异有统计学有意义(F = 77.22, P < 0.05), 随着浓度增加生长率渐降低, 各紫檀芪组与对照组比较, 均P < 0.05。紫檀芪作用H8细胞24 h后, 各组细胞G1期、G2期、S期细胞比例差异均有统计学意义(F = 7 845.00、51.14、266.50, 均P < 0.05), 各紫檀芪组G1期、G2期细胞比例均高于对照组, S期细胞比例均低于对照组(均P < 0.05)。紫檀芪作用48 h后, 0 ～ 100 μmol/L组细胞凋亡率分别为11.58% ± 0.50%、14.66% ± 0.22%、13.50% ± 0.49%、14.56% ± 0.19%、15.30% ± 0.76%, 各紫檀芪组均高于对照组(均P < 0.05)。紫檀芪作用24 h后细胞MDC染色显示, 对照组中仅有少量H8细胞检测到高亮点状荧光, 各紫檀芪组高亮点状荧光的自噬小体较对照组增多。Western印迹显示, 紫檀芪作用24 h、48 h后各组细胞cyclinD1、caspase3、caspase9、Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、ATG5、P62、E6、E7蛋白相对表达水平差异均有统计学意义(均P < 0.05)。与对照组比较, 紫檀芪处理后cyclinD1表达降低, caspase3、caspase9表达升高, Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、ATG5、P62升高, E6、E7表达降低(个别浓度组与对照组比较P > 0.05, 多数组间比较P < 0.05)。结论紫檀芪可抑制H8细胞增殖, 促进其凋亡和自噬, 抑制E6、E7致癌基因的表达。

• 单位
  广州市皮肤病防治所