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摘要
尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG）作为生物体内的DNA修复酶系，能有效水解单链或双链DNA上的尿嘧啶，可用于PCR过程中残留污染物的清除.本研究以PCR预混液试剂盒作为检测工具，以鲤浮肿病和罗非鱼湖病的阳性核酸片段检测为例，探讨了巢式和荧光定量PCR检测时，UDG的抗污染效果.研究结果表明：（1）向PCR反应体系中添加200μmol/L的dUTP，可保证扩增产物中有足够的尿嘧啶掺入，且对扩增效率影响较小.（2）使用0.2 U/10μL的UDG浓度，可清除常规PCR中99.9%以上（多数大于99.95%）的阳性污染物，或清除荧光定量PCR（探针法）中96.5%以上的阳性污染物.继续增加UDG用量，则污染物清除效率的提高有限.本研究为特定条件下UDG对污染性模板的清除效果做了定量统计，能为该技术的具体应用与进一步优化提供实验依据.
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单位闽南师范大学; 福建傲农生物科技集团股份有限公司
