伪狂犬病病毒变异株US3基因失活株的构建与生物学特性分析

作者：吕家轩; 张传健; 侯继波; 费荣梅^*; 王继春^*

来源：畜牧与兽医, 2020, 52(08): 95-100.

• 伪狂犬病病毒
• 细菌人工染色体
• US3基因
• 点突变
• 生物学特性

为探究US3基因失活对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)变异株毒力的影响,运用En Passant操作技术,将PRV变异株AH02LA细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)BACPRV-G中US3基因的起始密码子进行点突变,获得重组BAC株BACPRV-G-US3mut。将BACPRV-G-US3mut与带有同源臂和PRV AH02LA gE/gI基因的片段共转染猪睾丸(ST)细胞,拯救病毒的同时将gE/gI基因进行恢复,获得重组病毒PRV-US3mut。生长动力学试验发现:PRV-US3mut在感染ST细胞早期(6 h和12 h)无病变发生,在感染24 h之后,与亲本毒株PRV AH02LA生长动力学相似,表明US3基因可能介导病毒增殖的早期阶段。此外,研究发现了US3基因抑制PRV感染ST细胞早期组织相容性复合物Ⅰ的mRNA转录。BALB/c小鼠的致病力试验发现,相较于亲本毒株PRV AH02LA(LD50=10-3.26/0.2mL),PRV-US3mut(稀释10-2～10-5)攻毒小鼠全部存活,表明US3基因可能介导PRV对小鼠的致病性。本研究成功构建了PRV变异株US3基因失活株,为研制针对PRV变异株的弱毒疫苗奠定了基础。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 江苏省农业科学院