用聚乙二醇沉淀法提取脐带间充质干细胞源外泌体抑制PASMCs增殖

作者：张雨薇; 牛菊红; 刘川川; 毛稼琦; 张晴晴; 刘红; 陈英^*; 马兰^*

来源：中国高原医学与生物学杂志, 2023, 44(04): 217-226.

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2023.04.001

• 聚乙二醇
• 沉淀法
• 人脐带间充质干细胞
• 外泌体
• 肺动脉平滑肌细胞
• 低氧性肺动脉高压

目的 用聚乙二醇(PEG 6000)沉淀法提取人脐带间充质干细胞源外泌体(hUCMSCs-exo);观察hUCMSCs-exo对低氧诱导的PASMCs增殖的抑制作用。方法 培养人脐带间充质干细胞并鉴定。低速离心提取脐带间充质干细胞培养上清液的hUCMSCs-exo。用透射电子显微镜观察hUCMSCs-exo形态，用考马斯亮蓝及BCA试剂盒检测hUCMSCs-exo蛋白质含量，用Western Blot法检测hUCMSCs-exo表面标记物CD63/Alix/TSG101蛋白的表达水平，用激光共聚焦显微镜观察PASMCs摄取hUCMSCs-exo情况，用EdU法检测hUCMSCs-exo对低氧诱导的大鼠PASMCs增殖的影响，用Western Blot法检测PASMCs核增殖抗原(PCNA)蛋白表达水平，用cck-8法测定用不同浓度hUCMSCs-exo干预低氧诱导后PASMCs的细胞吸光度值。结果 通过低速离心成功分离出hUCMSCs-exo。透射电镜下的hUCMSCs-exo为圆形或椭圆形。考马斯亮蓝结果显示，hUCMSCs-exo蛋白条带表达清晰。BCA定量结果显示，PEG 6000溶液浓度为10%时提取的hUCMSCs-exo浓度最高。用激光共聚焦显微镜观察到，用PKH26标记的hUCMSCs-exo能被PASMCs内化。EdU与Western Blot结果显示，hUCMSCs-exo可以抑制PASMCs增殖，P<0.05。cck-8结果显示，hUCMSCs-exo抑制PASMCs增殖，且当hUCMSCs-exo浓度达80μg·mL-1时的细胞吸光度值明显降低，P<0.05。结论 PEG 6000沉淀法提取的hUCMSCs-exo可抑制低氧诱导的大鼠PASMCs增殖。

• 单位
  青海大学附属医院; 青海大学