南极假丝酵母脂肪酶B基因在大肠杆菌中的表达和发酵优化

作者：吴蓉; 曹佳睿; 曹君; 刘飞翔; 杨猛; 苏二正^*

来源：生物技术通报, 2021, 37(02): 138-148.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0529

• 南极假丝酵母脂肪酶B
• 大肠杆菌
• 可溶性表达
• 发酵优化

旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本。构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化。结果显示,带有PelB信号肽的重组菌pET25b-CALB-1/Rosetta(DE3)在20℃下使用0.5%(W/V)乳糖在TY培养基中诱导表达效果最好,优化后的合成培养基成分为1.75%(W/V)山梨醇、2.25%(W/V)鱼蛋白胨、1%(W/V)安琪酵母提取物、0.75%(W/V)Na2HPO4。在摇瓶中诱导60 h后,CALB酶活力最高达到35.67 U/mL,相比于初始发酵酶活力提高了17.77倍,是目前大肠杆菌生产CALB的最高水平。成功地构建了大肠杆菌表达系统,经过系统优化后,CALB的高水平可溶性表达得以实现。

• 单位
  南京林业大学; 南方现代林业协同创新中心